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FLAG肽；DYKDDDDK；98849-88-8

news 2025/1/18 7:39:16

【FLAG肽简介】

FLAG肽是一种常用于蛋白质研究的多肽标签，由八个氨基酸组成，序列为DYKDDDDK。这个标签具有亲水性，通常位于蛋白质的表面，便于抗体识别和纯化。FLAG肽还包含一个肠激酶切割位点，使得在纯化后可以通过肠激酶处理移除标签，恢复蛋白质的天然状态。

【中文名称】FLAG肽；FLAG标签肽

【英文名称】FLAG Peptide

【分子式】C41H60N10O20

【分子量】1012.97

【 C A S 】98849-88-8

【单字母】NH2- DYKDDDDK -COOH

【三字母】NH2- Asp - Tyr - Lys - Asp - Asp - Asp - Asp - Lys -COOH

【结构式】

【理化性质】

Number of residues:		8
Molecular weight:		1012.97 g/mol
Extinction coefficient:		1280 M-1cm-1
Iso-electric point:		pH 3.53
Net charge at pH 7:		-3
Estimated solubility:		Good water solubility.

【FLAG肽应用】

FLAG肽广泛应用于蛋白质表达和纯化领域。通过将FLAG标签与目标蛋白融合，可以利用特异性的抗FLAG抗体或亲和树脂进行高效的蛋白质捕获和纯化。这种方法适用于从细胞裂解液、组织提取物或发酵液中分离目标蛋白，且对蛋白质的活性影响较小。此外，FLAG标签还可以用于蛋白质的检测和定位研究，如通过西方印迹（Western blot）和免疫荧光等技术。

【FLAG肽主要用途】

FLAG肽通常用作蛋白质工程中的标签，它能够帮助研究者在蛋白质表达、纯化、鉴定和功能研究等方面进行操作。以下是FLAG肽的一些关键用途：

1、蛋白质表达和纯化：FLAG标签可以融合到目标蛋白的N端或C端，使得蛋白质更容易在宿主细胞中表达。由于FLAG标签具有较高的亲水性和抗原性，它可以增加蛋白质的溶解度并提高纯化效率。通过亲和层析技术，可以利用特定的抗FLAG抗体从复杂样品中快速分离出目标蛋白。

2、蛋白质检测和鉴定：FLAG标签的存在使得蛋白质可以通过西方印迹（Western Blot）、酶联免疫吸附测定（ELISA）等免疫学方法进行检测和定量分析。抗FLAG抗体能够特异性结合FLAG标签，从而实现对含有FLAG标签的融合蛋白的识别和分析。

3、蛋白质功能研究：FLAG标签的引入对蛋白质的功能通常影响较小，因为它不改变蛋白质的自然构象。这使得研究者可以在不干扰蛋白质生物学活性的前提下，对其进行后续的功能性研究。

4、蛋白质定位研究：通过融合FLAG标签，可以利用免疫荧光标记等技术研究蛋白质在细胞内的定位和动态变化。

5、蛋白质切割：FLAG标签序列中包含一个肠激酶切割位点，通过特定的蛋白酶处理可以去除FLAG标签，从而获得未经标签修饰的天然蛋白质，这对于研究蛋白质的原生状态和功能至关重要。

【FLAG标签纯化蛋白质的步骤】

FLAG标签纯化蛋白质通常涉及以下几个关键步骤：

1、表达带有FLAG标签的蛋白质：首先，您需要构建一个重组质粒，其中包含目标蛋白的编码序列以及位于N端或C端的FLAG序列（DYKDDDDK）。然后将这个质粒转化入宿主细胞（如大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞）进行表达。

2、裂解细胞并提取蛋白质：表达后，收集细胞并通过适当的裂解方法（如超声破碎、高压均质或化学裂解剂处理）释放含有FLAG标签的蛋白质。

3、抗体亲和层析：使用抗FLAG抗体包被磁珠或琼脂糖树脂进行亲和层析。当裂解液通过这些固定化的抗体时，FLAG标签的蛋白质会特异性地结合到抗体上。未结合的蛋白质和其他分子则可以通过洗涤步骤去除。